PCR / POLIMERASE CHAIN REACTION

 PCR / POLIMERASE  CHAIN  REACTION

Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) adalah tehnik  laboratorium yang mapan

yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi keberadaan materi genetik tertentu melalui proses 

biokimia amplifikasi menggunakan enzim dan didasarkan pada target tertentu.

Materi genetik mencakup DNA dan RNA, tetapi dalam konteks RT-PCR , RNA yang terdeteksi. 

SARS-CoV-2 memiliki genom RNA. 

Manfaat utama RT-PCR yaitu dalam kemampuan untuk mendeteksi sejumlah kecil RNA patogen dalam waktu yang sangat singkat.

Oleh karena itu RT-PCR telah merevolusi kecepatan dan sensitivitas klinis diagnostik dan dapat 

disesuaikan untuk menguji  yang besar menggunakan otomatisasi dengan mengurangi  kebutuhan akan keahlian teknis. 

Aplikasi modern RT-PCR memungkinkan terjadinya reaksi untuk dipantau selama setiap tahap, yang 

dikenal sebagai RT-PCR.

RT-PCR mendeteksi adanya materi genetik virus dalam sampel tetapi tidak mampu membedakan apakah ada virus yang infeksius.

Polymerase chain reaction (PCR) adalah teknik yang digunakan untuk "memperkuat" segmen kecil DNA.

PCR adalah metode yang banyak digunakan untuk membuat jutaan hingga milyaran salinan sampel DNA tertentu dengan cepat, memungkinkan para ilmuwan untuk mengambil sampel DNA yang sangat kecil dan memperkuatnya menjadi jumlah yang cukup besar untuk dipelajari secara mendetail

Menggunakan PCR, salinan sekuens DNA dalam jumlah yang sangat kecil diperkuat secara eksponensial dalam serangkaian siklus perubahan suhu.

Mayoritas metode PCR mengandalkan siklus termal.

Kadang-kadang disebut "fotokopi molekuler", reaksi berantai polimerase (PCR) adalah teknik yang cepat dan murah yang digunakan untuk "memperkuat"  - segmen kecil DNA. 

Karena sejumlah besar sampel DNA diperlukan untuk analisis molekuler dan genetik, studi tentang potongan DNA yang diisolasi hampir tidak mungkin dilakukan tanpa amplifikasi PCR.

Seringkali digembar-gemborkan sebagai salah satu kemajuan ilmiah terpenting dalam biologi molekuler, PCR merevolusi studi DNA sedemikian rupa sehingga penciptanya, Kary B. Mullis, dianugerahi Hadiah Nobel untuk Kimia pada tahun 1993.

PCR adalah salah satu tes diagnostik yang paling banyak digunakan untuk mendeteksi patogen, termasuk virus, yang menyebabkan penyakit seperti Ebola, demam babi Afrika, dan penyakit kaki-dan-mulut. 

Karena virus COVID-19 hanya mengandung RNA, maka digunakan RT-PCR real time atau konvensional untuk mendeteksinya.

KEGUNAAN

Setelah diamplifikasi, DNA yang dihasilkan PCR dapat digunakan di banyak prosedur laboratorium yang berbeda. Misalnya, sebagian besar teknik pemetaan dalam Proyek Genom Manusia (HGP) mengandalkan PCR.

PCR juga berharga di sejumlah laboratorium dan teknik klinis, termasuk sidik jari DNA, deteksi bakteri atau virus (terutama AIDS), dan diagnosis kelainan genetik.

Untuk penyakit pernapasan seperti COVID-19, usap nasofaring dianggap paling andal, karena sampel tersebut mengambil sampel area saluran pernapasan tempat virus tampaknya pertama kali menginfeksi seseorang. 

Situs ini relatif mudah diakses, dibandingkan dengan tempat terakhir infeksi virus: saluran pernapasan bagian bawah.

PCR PROSES

Langkah 1: Denaturasi

Seperti pada replikasi DNA, dua untai dalam heliks ganda DNA perlu dipisahkan.

Pemisahan terjadi dengan menaikkan suhu campuran, menyebabkan ikatan hidrogen antara molekul DNA beruntai ganda DNA komplementer yang dibuat di laboratorium dari kerangka RNA untai tunggal. untaian putus. 

Suhu : 95 C

Langkah 2: Annealing

Primer mengikat urutan DNA target dan memulai polimerisasi. Ini hanya dapat terjadi setelah suhu larutan diturunkan. Satu primer mengikat setiap untai.

Suhu : 60 C

Langkah 3: Ekstensi